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特定蛋白分析儀的分析方法
2019-03-22 13:32:11
特定蛋白分析儀分析方法主要有這么幾種，微量凱氏定氮法 、雙縮脲法、Folin—酚試劑法 、改良的簡易Folin—酚試劑法、考馬斯亮蘭法，那么這幾種方法各有什么特點呢？
1.微量凱氏定氮法，樣品與濃硫酸共熱。含氮有機物即分解產(chǎn)生氨（消化），氨又與硫酸作用，變成硫酸氨。經(jīng)強堿堿化使之分解放出氨，借蒸汽將氨蒸至酸液中，根據(jù)此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量。敏度低，誤差大，耗時長。
2.雙縮脲法
雙縮脲是兩個分子脲經(jīng)180℃左右加熱，放出一個分子氨后得到的產(chǎn)物。在強堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物，稱為雙縮脲反應(yīng)。凡具有兩個酰胺基或兩個直接連接的肽鍵，或能過一個中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應(yīng)。 此法的優(yōu)點是較快速 ，不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近，以及干擾物質(zhì)少。主要的缺點是靈敏度差。因此雙縮脲法常用于需要快速，但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測定。 測定快速，但是靈敏度差，不精確。
3.Folin—酚試劑法
這種蛋白質(zhì)測定法是靈敏的方法之一。過去此法是應(yīng)用廣泛的一種方法，由于其試劑乙的配制較為困難（現(xiàn)在已可以訂購），近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深蘭色的原因是：在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物。測試靈敏度高，是較為常用的方法
4.改良的簡易Folin—酚試劑法
改良的快速簡易法，可獲得與 Folin—酚試劑法相接近的結(jié)果原理與方法三Folin—酚試劑法基本相同，，采用化學(xué)反應(yīng)顯色后，在660nm處用分光光度法分析。但更為快速簡易。
5.考馬斯亮蘭法
1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法，是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計的。這種蛋白質(zhì)測定法具有超過其他幾種方法的突出優(yōu)點，因而正在得到廣泛的應(yīng)用。這一方法是目前靈敏度高的蛋白質(zhì)測定法。 目前靈敏度高的蛋白質(zhì)測定法。干擾物質(zhì)少。用于不同蛋白質(zhì)測定時有較大的偏差。
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