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九陸生物特定蛋白分析儀談關(guān)于當(dāng)今IgG技術(shù)
2021-04-19 16:34:30
特定蛋白分析儀
IgG是哺乳類動物抗體的種型之一。抵抗病原入侵的抗體相關(guān)免疫力，主要由該種型下的四種類型所提供，也是唯一一種可以穿過胎盤為胎兒提供被動免疫力的種型。根據(jù)IgG技術(shù)在當(dāng)今醫(yī)療健康行業(yè)的應(yīng)用很廣泛，九陸生物特定蛋白分析儀品牌廠家介紹一下關(guān)于當(dāng)今IgG技術(shù)。
粗提法提取球蛋白，大多用硫酸銨鹽析法或硫酸鈉鹽析法。硫酸銨鹽析須經(jīng)過多次沉淀，第一次用40%飽和度，第二次用35%飽和度，第三次用33%飽和度，經(jīng)三次提取后的γ球蛋白基本是IgG成分。硫酸鈉法更簡便，用20%即可將γ球蛋白沉淀出來。經(jīng)鹽析后的γ球蛋白雖大多屬于IgG，但還有5%其他區(qū)帶蛋白，如γ區(qū)的雜蛋白。又因IgG組分中還含其他所謂正常的IgG，產(chǎn)生干擾。因此鹽析法粗提的γ球蛋白只能用于一般的實驗，或者是抗體效價較高的抗血清。
離子交換層析法提取IgG，常用的離子交換劑有DEAE纖維素或QAE纖維素，以QAE-Sephadex為理想，DE22、32、52也可應(yīng)用。取QAE-SephadexA25或A50經(jīng)酸處理并在0.05mol/LpH7.5～8.6的磷酸鹽緩沖液中平衡，將水分抽干，稱濕重Ig加于10ml血清中，在室溫30min后，離心或過濾除去離子交換劑。上清液再如此處理一次，即獲得較純的IgG，甚至不含其他雜蛋白。用該技術(shù)純化IgG簡便，不損壞抗體，既可小量提取，也可大量制備。
親和層析法提取特異性IgG，將純化抗原或粗制抗原（如是單價特異性則對抗原要求不高）交聯(lián)Sepharose4B制成親和層析柱，將抗血清過柱后洗去未結(jié)合的雜蛋白，再用硫氰酸鉀洗脫，流出的是純的特異性IgG抗體。因硫氰酸鉀對抗體有破壞作用，應(yīng)及時透析除去。純化的IgG因含量低，失去保護作用，應(yīng)及時應(yīng)用或凍干保存，亦可20℃保存，但皆不理想；加入三乙醇胺或甘油可起保護作用。
酶解法制備F2片段，胃蛋白酶對IgG的作用點是在連接兩重鏈的二硫鍵靠C端處（232氨基酸處），結(jié)果兩個Fab由二硫鍵連接，保留了抗體的結(jié)合點。與IgG相比，F(xiàn)（ab'）2的特點是去掉了Fc段，這樣在細胞免疫實驗中免除了受體作用；同時也使IgG失去主要的抗原特性，不被抗IgG抗體結(jié)合；在反向間接血凝中，用F（ab'）2致敏羊紅細胞比用IgG效果好。
